一、原理
本产品是基于胶体金侧向层析技术的HIV-1 P24蛋白半定量检测卡,可以用于相关慢病毒载体和假病毒包装效率的快速评估。该检测卡的检测下限为1ng/mL,当样品中P24浓度在1ng/mL至500ng/mL时,检测线颜色的深浅与P24浓度呈正相关,通过与比色卡比较,可以半定量待检标本中P24蛋白浓度。
二、用途
1.基于HIV-1的慢病毒载体包装效率检测:传统的慢病毒包装效率检测的方法有ELISA法(检测P24蛋白含量)和Real-time PCR法(检测核酸拷贝数),这两种方法都耗时费力,且成本高。本产品使用简便,检测时间短,可以随时对转染效果进行评估。如在更换培养基时,吸取样品滴加到试纸上,10-15min后即可判读结果。因此,使用本快速检测试纸,可以快速评估转染效果。
2.基于HIV-1的假病毒包装效率检测:同样含有P24蛋白,在转染后,可以使用本检测卡对包装效果进行快速评估。
图1. 检测卡显色样式
图2. 比色卡
*一个慢病毒颗粒(Lentiviral Particle, LP)中约有2000个P24蛋白分子,用以下公式可以计算慢病毒载体的颗粒数(LP):
一个LP相当于:2000×24×103/(6×1023)g of P24=8×10-5 pg of P24;或者说,1ng P24=1.25×107 LPs(≈1.25×104-5 TU**)
**正常情况下,每100-1000 LPs中会有1个具有感染活性的病毒载体,即1 TU(Transducing Unit)。
注意:上述公式计算得到的LP值是理论值,检测样品中含有的游离的P24蛋白可能会使该值偏高。
提示:通常上清中病毒含量需要超过106 TU/ml,才能确保浓缩纯化后得到足够浓度的慢病毒载体(一般能浓缩150倍左右)。