NEB升级内切酶Buffer，相关问答

发布者：信息部    发布时间：2015-05-06

1.  Q:为什么 NEB 要升级所有限制性内切酶的反应缓冲液体系？

    A：尽管原来的内切酶反应缓冲液体系反应效果良好，但 NEB 一直致力于提升产品的使用便捷性和产品的品质。升级后的 CutSmart 反应缓冲液中加入了 BSA，使得有超过 200 种内切酶都能在这个体系中发挥最佳活性，极大地提高了内切酶的使用便捷性，尤其是在进行双酶切时。此外，也避免了建立酶切反应体系时额外添 BSA 的步骤。

2.  Q：如果有原来的限制性内切酶，我该使用哪种反应缓冲液呢？

    A：所有的 NEB 内切酶都用彩色标签来标示应该选用何种 NEB 反应缓冲液。这个彩色标识系统既可以用于以前提供的 NEB 反应缓冲液，也可以用于更新后的反应缓冲液。

3.  Q：目前我有原来购买的限制性内切酶，它现在在更新后的反应缓冲液中还有活性吗？

     A：有，在产品有效期内仍可以使用。更新后的缓冲液与原来的缓冲液大致相同，不同点仅在：BSA 已经提前加入到缓冲液中；更新后的缓冲液不再含有 DTT。BSA 不会破坏反应，在某些情况下甚至可以提高反应效率。大量的实验证明，内切酶反应不需要添加 DTT。

4.  Q：目前我有原来的 NEB 内切酶反应缓冲液，可以继续使用还是需要扔掉？

    A：在产品有效期内，可以继续使用。建议添加 BSA 以确保内切酶达到最佳反应活性。

5.  Q：为什么要在所有的限制性内切酶反应缓冲液中都加入 BSA？

    A：为了提高使用便捷性。NEB 在所有的限制性内切酶反应缓冲液中添加了 BSA，因此建立反应时无需额外单独加入，这使得建立内切酶反应更简便，更快捷，并减少了存储管的数目。

6.  Q：为什么将 DTT 从限制性内切酶的反应缓冲液中去除？

    A：内切酶反应缓冲液中加入 DTT 是有历史渊源的，在分子生物学的研究中，DTT 通常被添加到酶学反应缓冲液中，因此在内切酶研发初期，DTT 也被加入到内切酶反应缓冲液中，然而经过大量的研究，我们发现 DTT 并不是发挥内切酶活性所必需的成分。此外，BSA 在有 DTT 存在的情况下反复冻融会形成白色沉淀。

7.  Q：更新后的缓冲液体系对限制性内切酶本身特性有何影响？

    A：内切酶的特性没有发生任何改变。但是少数内切酶添加 BSA 后活性增强，因此为了保证酶活不变，我们对这些蛋白的浓度做了相应的微调。

8.  Q：我的内切酶随酶提供的是其它 NEB 缓冲液，但是现在推荐的是 CutSmart 缓冲液，这是为什么呢？

    A：更新缓冲液体系后，目前有超过 200 种内切酶都能在统一的 CutSmart 缓冲液中发挥最佳活性，极大地提高了内切酶的使用便捷性。

9.  Q：有的酶在原来的缓冲液活性表中显示其在 NEBuffer4 中的活性是 50%，但现在随酶提供的是 CutSmart  缓冲液，为什么？

    A：更新后的缓冲液系统中添加了 BSA，这使得一些酶在 CutSmart 缓冲液中能发挥最佳活性，目前有超过 200 种内切酶都能在统一的 CutSmat 缓冲液中发挥最佳活性，极大地提高了内切酶的使用便捷性。

10.  Q：为什么不是所有的 NEB 内切酶在 CutSmart 缓冲液中都有活性？

    A：一些内切酶的反应需要在高盐浓度条件下进行，但是 CutSmart 缓冲液是低盐缓冲液。目前有超过 200 种内切酶都能在统一的 CutSmart 缓冲液中发挥最佳活性，余下的内切酶则需要在其它缓冲液中达到最佳效果。详情请参见 www.neb.com 网站上的内切酶活性表。

11.  Q：更新后的缓冲液中添加了 BSA，它对于 NEB 的限制性内切酶反应效果有什么影响吗？

    A：在缓冲液中加入 BSA 不会对反应产生任何不良影响，而且有些情况下，内切酶的活性反而会增强。

12.  Q：如何用更新前、后的缓冲液做双酶切？

    A：我们建议使用 Double Digest Finder 软件（可以在 www.neb.com 网站上点击 Tools and Resources 的选项）查找最适反应缓冲液，也可以在原来的缓冲液体系中添加终浓度为 100 μg/ml 的 BSA 即可。

13.  Q：为什么在 NEB 官方网站的产品单页上写明内切酶将配备更新后的缓冲液，而收到的产品仍是原来的缓冲液？

    A：目前我们正在进行内切酶新、旧缓冲液系统之间的转换工作，在今后的几个月中，含有新缓冲液系统的内切酶将逐步替换掉现有库存产品。虽然我们正在尽可能快的进行这项转换工作，但短期内您仍可能会收到含有旧缓冲液的内切酶包装。如果您希望收到新缓冲液系统的产品，请联系 info@neb.com 。关于内切酶在原来缓冲液系统中的活性信息仍可在 NEB 官方网站上进行查询。

14.  Q：什么时间可以提供所有内切酶的新缓冲液系统？

    A： NEB 目前正在努力确保全部内切酶的新缓冲液系统的转换工作在 2013 年年中完成。

15.  Q：原来的内切酶缓冲液（不包含 BSA）是否仍会销售？

    A：是的。原来的缓冲液剂型仍会使用原有货号来进行销售。

16.  Q：我曾经使用的NEB 内切酶是低浓度的，为什么现在浓度提高了，变成 10,000 U/ml 的内切酶了呢？

    A：NEB 已经将大部分内切酶浓度标准化为 10,000 U/ml，其目的主要是便于使用，同时在相同反应条件下，甘油浓度越低，酶切效率会越高。

17.  Q：我看到 NEB 对限制性内切酶缓冲液体系进行了重新命名，NEBuffer 1 命名为 NEBuffer 1.1，NEBuffe r2 命名为 NEBuffer 2.1，NEBuffer 3 命名为 NEBuffer 3.1，为什么 NEBuffer 4 不命名为 NEBuffer 4.1 呢？

    A：向 NEBuffer 4 中加入 BSA 并去除 DTT 后，NEB 将 NEBuffer 4 的名称改为 CutSmart 反应缓冲液。我们认为 CutSmart 这个名称能更好的体现这个缓冲液的特性，目前有超过 200 种内切酶都能在 CutSmart 缓冲液中发挥最佳活性，极大地提高了内切酶的使用便捷性。此外，许多下游克隆用酶在 CutSmart 缓冲液的反应中表现也相当出色（详情请见 www.neb.com）。

18.  Q: NEB 限制性内切酶缓冲液的彩色标识系统很有用（黄、蓝、红、绿），在更新后的缓冲液体系中会保留吗？

    A：会保留。NEB 将保留原有的缓冲液彩色标识系统，NEBuffer 1.1 为黄色，NEBuffer 2.1 为蓝色，NEBuffer 3.1 为红色，CutSmart 缓冲液为绿色。

19.  Q：我不想在缓冲液中加入 BSA，有何选择吗？

    A：NEB 原有的缓冲液系统中不含有 BSA，可以单独购买，之后 NEB 将继续提供这套原有的缓冲液系统。需注意的是：内切酶的稀释液中一直含有 BSA 。

20.  Q：NEB的修饰酶在 CutSmart  缓冲液中表现如何？

    A：NEB 已经对克隆流程中所涉及的多种修饰酶进行了测试，结果证明这些修饰酶在 CutSmart 缓冲液中几乎都有 100%  的活性。详情请登录 www.neb.com ，参照相关图表。

21.  Q：我手中的酶不再有省时酶切的特性了，这是怎么回事？

    A：省时内切酶（Time-Saver）的原始定义：能在 5-15 分钟内快速酶切底物DNA的任何一种限制性内切酶称之为省时内切酶。现在，我们对省时内切酶的定义进行了严格地界定，即符合省时内切酶定义的酶在进行酶切反应时不能够产生任何不良影响。如果您手中的内切酶原来是省时内切酶，但现在不是了，这意味着该酶仍然可以在 5-15 分钟内酶切 DNA，但有可能不能过夜酶切，这种情况下一般会有注释。省时内切酶的完整列表请详见 www.neb.com 。

22.  Q：我使用省时内切酶（Time-Saver）进行酶切时，反应时间必须控制在 5-15 分钟吗？是否可以延长酶切时间？

    A：NEB 省时内切酶的好处在于：可以快速完成酶切（5-15 分钟），也可以同样出色地完成过夜酶切的需求。

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